博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的酶標(biāo)儀作為國(guó)產(chǎn)自主研發(fā)設(shè)備，采用先進(jìn)的雙波長(zhǎng)光路設(shè)計(jì)與精準(zhǔn)溫控系統(tǒng)，支持96孔板檢測(cè)，可適配多種ELISA試劑盒。

一、材料與方法

（一）儀器與試劑

1、核心儀器：博清生物酶標(biāo)儀；對(duì)照儀器為某進(jìn)口品牌酶標(biāo)儀；qPCR儀。

2、試劑：HBsAg ELISA檢測(cè)試劑盒、IAV NP ELISA檢測(cè)試劑盒、SARS-CoV-2 S蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒；HBV、IAV、SARS-CoV-2標(biāo)準(zhǔn)品；陰性對(duì)照品（健康人血清/咽拭子裂解液，經(jīng)qPCR驗(yàn)證無(wú)目標(biāo)病毒）；其他試劑均為試劑盒配套產(chǎn)品。

（二）樣本來(lái)源

1、HBV相關(guān)樣本：50例（25例qPCR陽(yáng)性慢性乙肝患者血清，25例健康體檢者血清）；

2、IAV相關(guān)樣本：50例（25例qPCR陽(yáng)性流感患者咽拭子裂解液，25例健康人咽拭子裂解液）；

2、SARS-CoV-2相關(guān)樣本：50例（25例qPCR陽(yáng)性感染者鼻咽拭子裂解液，25例健康人鼻咽拭子裂解液）。

（三）實(shí)驗(yàn)方法

1、靈敏度檢測(cè)：將HBV、IAV、SARS-CoV-2標(biāo)準(zhǔn)品用稀釋液梯度稀釋，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)重復(fù)孔，按ELISA試劑盒說(shuō)明書操作。以“OD值≥2.1×陰性對(duì)照OD值”為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)，最低陽(yáng)性濃度即為最低檢出限。

2、特異性檢測(cè)：取HBV陽(yáng)性樣本分別與IAV、SARS-CoV-2 ELISA試劑盒反應(yīng)，IAV陽(yáng)性樣本分別與HBV、SARS-CoV-2試劑盒反應(yīng)，SARS-CoV-2陽(yáng)性樣本分別與HBV、IAV試劑盒反應(yīng)，設(shè)陰性對(duì)照與陽(yáng)性對(duì)照，檢測(cè)OD值，計(jì)算交叉反應(yīng)率。

3、重復(fù)性檢測(cè)：選取3個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)重復(fù)孔，同批次檢測(cè)，連續(xù)檢測(cè)3天，計(jì)算CV值。

二、結(jié)果

（一）靈敏度結(jié)果。。。。

博清生物酶標(biāo)儀對(duì)3種病毒標(biāo)志物的最低檢出限均低于試劑盒說(shuō)明書要求。

（二）特異性結(jié)果

所有交叉反應(yīng)試驗(yàn)中，待檢病毒與非目標(biāo)試劑盒反應(yīng)的OD值均<2.1×陰性對(duì)照OD值，交叉反應(yīng)率為0%，表明博清生物酶標(biāo)儀檢測(cè)無(wú)交叉反應(yīng)，特異性良好。

（三）重復(fù)性結(jié)果

批內(nèi)與批間重復(fù)性試驗(yàn)的CV值均<5%，符合臨床檢測(cè)重復(fù)性要求（CV<10%），表明博清生物酶標(biāo)儀檢測(cè)穩(wěn)定性良好。

（四）臨床樣本檢測(cè)結(jié)果。。。。

博清生物酶標(biāo)儀與進(jìn)口酶標(biāo)儀對(duì)150例臨床樣本的檢測(cè)符合率無(wú)顯著差異（P>0.05），且兩者與qPCR的符合率均>90%，表明博清生物酶標(biāo)儀臨床適用性良好。

三、討論

本研究從性能驗(yàn)證與臨床應(yīng)用兩方面，系統(tǒng)評(píng)估了博清生物酶標(biāo)儀在病毒性疾病病原體檢測(cè)中的價(jià)值，核心發(fā)現(xiàn)如下：

（一）靈敏度與特異性滿足臨床需求：博清生物酶標(biāo)儀對(duì)HBsAg、IAV NP及SARS-CoV-2S蛋白的LOD均低于試劑盒要求，且無(wú)交叉反應(yīng)，這得益于其雙波長(zhǎng)光路設(shè)計(jì)——通過(guò)參考波長(zhǎng)校正背景干擾，減少非特異性吸附對(duì)OD值的影響，從而提升檢測(cè)靈敏度與特異性。相較于傳統(tǒng)單波長(zhǎng)酶標(biāo)儀，該設(shè)計(jì)可有效降低假陰性與假陽(yáng)性率，尤其適用于低濃度病毒樣本（如早期感染患者）的檢測(cè)。

（二）重復(fù)性與穩(wěn)定性優(yōu)異：批內(nèi)、批間CV值均<5%，表明儀器光學(xué)系統(tǒng)與溫控系統(tǒng)穩(wěn)定性良好。博清生物酶標(biāo)儀采用進(jìn)口光源與光電倍增管，確保波長(zhǎng)精度與信號(hào)采集的一致性；同時(shí)，其96孔板均一性溫控（±0.5℃）可避免孵育溫度差異導(dǎo)致的酶促反應(yīng)效率波動(dòng)，進(jìn)一步保障檢測(cè)重復(fù)性。

（三）臨床應(yīng)用性價(jià)比高：與進(jìn)口酶標(biāo)儀相比，博清生物酶標(biāo)儀的臨床符合率僅低2%，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但設(shè)備采購(gòu)成本降低約30%，且耗材兼容性強(qiáng)（可適配國(guó)內(nèi)外主流ELISA試劑盒）。此外，其操作軟件支持樣本信息錄入、結(jié)果自動(dòng)判讀與數(shù)據(jù)導(dǎo)出，簡(jiǎn)化了批量檢測(cè)流程，適合基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)或科研實(shí)驗(yàn)室的高通量篩查需求。

（四）研究局限性

本研究?jī)H納入3種病毒，未來(lái)需拓展至其他常見(jiàn)病毒性疾?。ㄈ绫透窝撞《?、水痘 - 帶狀皰疹病毒）的檢測(cè)驗(yàn)證；

樣本量較?。?50例），需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證儀器的臨床適用性；

未評(píng)估儀器在極端環(huán)境（如高溫、高濕）下的性能，后續(xù)可開(kāi)展環(huán)境適應(yīng)性試驗(yàn)。

（五）應(yīng)用展望

博清生物酶標(biāo)儀可在以下場(chǎng)景發(fā)揮重要作用：

1、基層醫(yī)療篩查：用于病毒性疾病（如流感、乙肝）的初篩，降低qPCR的檢測(cè)壓力；

2、科研領(lǐng)域：支持病毒感染機(jī)制研究（如病毒載量動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)）、疫苗免疫原性評(píng)估（如抗體效價(jià)檢測(cè)）；

3、突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急響應(yīng)：在病毒暴發(fā)時(shí)快速開(kāi)展批量樣本篩查，助力疫情防控。

四、結(jié)論

博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的酶標(biāo)儀在病毒性疾病病原體檢測(cè)中具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、性價(jià)比高的優(yōu)勢(shì)，可滿足臨床科研與基層醫(yī)療的檢測(cè)需求。該儀器的推廣應(yīng)用將為病毒性疾病的早期診斷與防控提供可靠的技術(shù)支撐，同時(shí)推動(dòng)國(guó)產(chǎn)酶標(biāo)儀在醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域的自主創(chuàng)新發(fā)展。